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Polysciences 24765-1試劑

Polysciences 24765-1試劑

更新時間:2024-04-28

產品特點:
Polysciences 24765-1試劑,細胞轉染在基因表達和蛋白質研究領域至關重要。Polysciences 24765-1,作為一種有效的轉染試劑,能夠高效地將DNA引入細胞內。本文將詳細介紹Polysciences 24765-1的使用方法。
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一、貼壁細胞轉染:Polysciences 24765-1試劑

以293T細胞為例,需要精確控制轉染條件以確保*高效率。以下是具體步驟:

細胞準備:

使用膠原酶處理細胞并計數。在6孔板中以每孔2×106細胞接種。每孔加入2 mL新鮮的DMEM/F12+5%FBS 培養基和1 mL的細胞懸液,置于37℃,5%CO2培養箱培養24 h。24 h后,移除之前培養基,每孔加入2 mL新鮮的DMEM/F12+5%FBS。

轉染過程:

1.檢查細胞匯合度,達到70%-80%時開始轉染。

2.分別用兩份100 µL無血清培養基稀釋DNA,使DNA終濃度為1 µg/ml(DNA/總培養體積)和適當比例的適量Polysciences 24765-1。DNA:PEI 的比例要依據自己實驗摸索最適比例。

3.將稀釋的Polysciences 24765-1轉染試劑與質粒(總體積200 µL)輕輕混勻,室溫孵育30 分鐘。

4.PEI-DNA 復合物滴加到細胞培養板每個孔中,輕搖混勻。注意輕輕沿著孔板邊緣滴入,以免破壞細胞的粘附性。

5.將培養板放入37℃,5%CO2培養箱培養中培養24 h。

結果觀察:

在24小時后使用熒光顯微鏡觀察轉染效果,超過80%的293T 細胞在轉染后的24 h可以觀察到綠色熒光。

二、懸浮細胞轉染:Polysciences 24765-1試劑

懸浮細胞轉染步驟略有不同,小規模轉染時,用新鮮的培養基重懸浮,使細胞密度達到 1×106cells/mL,如需大規模轉染細胞密度要到達2-3×106cellsml/mL。

以293F細胞為例:

細胞準備:

傳代接種于20 mL 懸浮細胞生長培養基中(36.5℃,120 rpm,5%CO2 )培養細胞至1×106 cells/mL的密度,旋緊瓶口放入搖床,2~4 小時后可以進行轉染。

轉染過程:

1.用1 mL無血清培養基稀釋適量的DNA,使DNA 終濃度為1 µg/ml,混勻并靜置5 min。

2.用1 mLOptiPRO

SFM(無血清培養基)稀釋適當比例的PEI 40000,混勻并靜置10 min。

3.將稀釋的24765-1轉染試劑與質粒輕輕混勻,室溫孵育30分鐘。

4.將PEI-DNA 轉染復合物逐滴加入到細胞培養液中,搖勻后旋緊瓶口放回搖床(36.5℃,5%CO2,120 rpm)。

5.基因表達可在24-72小時后檢測,時間取決于細胞系和轉基因。



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